Süt Duyarlılığı için Nitrofuran AHD ELISA Gıda Hızlı Test Kiti Antikoru 0.04ppb 96Wells/Kit

Süt Hassasiyeti için Nitrofuran AHD ELISA Gıda Güvenliği Test Kiti 0.04ppb 96Wells/Kit

 

1.Nitrofuran AHD ELISA Gıda Güvenliği Test KitiPrensip

 

Bu test kiti, numunedeki Aminohydantion'un (AHD) tespiti için rekabetçi enzim immünolojik testine dayanmaktadır.Birleştirme antijenleri, mikro-kuyulu şeritler üzerinde önceden kaplanmıştır.Numunedeki Aminohydantion (AHD) ve mikro kuyucuk şeritleri üzerine önceden kaplanmış kuplaj antijenleri, anti-AHD antikorları için rekabet eder.Enzim konjugatının eklenmesinden sonra, renklendirme için TMB substratı eklenir.Numunenin optik yoğunluk (OD) değeri, içindeki AHD ile negatif bir korelasyona sahiptir.Bu değer standart eğri ile karşılaştırılır ve ardından AHD konsantrasyonu elde edilir.

 

2.Nitrofuran AHD ELISA Gıda Güvenliği Test Kiti​Teknik özellikler

 

Hassasiyet: 0.04ppb

Kuluçka Sıcaklığı: 25℃

Kuluçka Süresi: 30dk～15dk

Tespit sınırı Doku, yumurta, bal: 0.1ppb

Çapraz reaksiyon oranı

%100

AMOZ < %0,1

AOZ < %0,1

SEM < %0,1

Geri Dönüşüm Oranı

Doku, yumurta %95±25

Bal 75±25%

 

3. Bileşenler

 

1	Mikro kuyu şeritleri	8 çıkarılabilir ile 12 şerit her biri kuyu
2	6 × standart solüsyon (her biri 1 mL)	0ppb	0.04ppb
		0.12ppb	0.36ppb
		1.08ppb	3.24ppb
3	enzim eşleniği	7ml	kırmızı şapka
4	Antikor çalışma çözümü	7ml	Mavi şapka
5	Yüzey A	7ml	Beyaz şapka
6	SubstratB	7ml	siyah kap
7	Çözümü durdur	7ml	sarı şapka
8	20x konsantre yıkama tamponu	40ml	Beyaz şapka
9	2 × konsantre yeniden çözünen çözelti	50ml	şeffaf kapak
10	2-Nitrobenzaldehit (C7H5NO3)	10ml	siyah kap

 

4. Gerekli ancak sağlanmayan malzemeler

 

1) Ekipmanlar:mikroplaka okuyucu, yazıcı, homojenizatör, nitrojen kurutma cihazı, vorteks, santrifüj, ölçüm pipetleri, terazi (0.01 g karşılıklı hassasiyet), inkübatör, su banyosu;

2) Mikropipetörler: tek kanallı 20-200µL, 100-1000µL ve çok kanallı 30~300µl;

3) Reaktifler: NaOH, etil asetat, n-Heksan, HCI (yaklaşık %36,5), K2HPO4·3H2O

 

5. Örnek ön işlem

 

Talimatlar

Her türlü numunenin ön işleme tabi tutulmasından önce aşağıdaki noktalara dikkat edilmelidir:

1) Deneyler için sadece tek kullanımlık uçlar kullanılabilir ve farklı reaktifleri absorbe etmek için kullanıldığında uçların değiştirilmesi gerekir;

2) Deneyden önce her deney ekipmanı temiz olmalı ve deney sonuçlarına müdahale eden kontaminasyonu önlemek için gerekirse tekrar temizlenmelidir.

Numune ön muamelesinden önce çözelti hazırlığı:

a)0.1 M K2HPO4: 11.4g K2HPO4·3H2O'yu deiyonize suda 500 mL'ye kadar çözün.

b)1 M HCl: 8.6mL HC1'i (yaklaşık %36.5) deiyonize suda 100mL'ye çözün.

c)1 M NaOH: 4g NaOH'yi deiyonize suda 100mL'ye çözün.

d) 2x konsantre yeniden çözündürme solüsyonu, numunenin yeniden çözündürülmesi için kullanılan 1:1 (1 mL konsantre yeniden çözündürme solüsyonu + 1 mL deiyonize su) deiyonize su ile seyreltilir.

 

5.1 Numune hazırlama

a) Doku, yumurta

1) 1± 0.05g homojenize numuneyi tartın, her tüpe 4mL distile su, 0.5mL 1 M HCI ve 100µL 2-Nitrobenzaldehit (C7H5NO3) ekleyin, 2 dakika boyunca uygun şekilde sallayın;

2) Gece boyunca 37°C'de (yaklaşık 16 saat) veya 56°C'de su banyosu (2 saat) ile inkübe edin.

3) Her tüpe 5mL 0.1M K2HP04, 0.4mL 1M NaOH ve 6mL etil asetat ekleyin, 30 saniye çalkalayın.

4) 10 dakika boyunca oda sıcaklığında (20-25 ℃) 4000r/dk'nın üzerinde santrifüjleyin (Emülsifikasyon varsa veya etil asetat tabakası 3 ml için yeterli değilse, numuneyi 80 ℃ su banyosunda 10 dakika inkübe edin ve tekrar tekrar santrifüjleyin; veya hızı artırın ve santrifüj süresini uzatın).

5) 3 mL etil asetat tabakasını yeni bir santrifüj tüpüne aktarın ve nitrojen veya hava ile 50°C'de kuruyana kadar buharlaştırın.

6) Kuru kalıntıları 2mL N-heksan içinde çözün, 1 mL seyreltilmiş yeniden çözme solüsyonunu ekleyin, 30 saniye boyunca uygun şekilde karıştırın, oda sıcaklığında (20-25 ℃) 10 dakika boyunca 4000 r/dk'nın üzerinde santrifüjleyin;Üst katman N-heksan fazını çıkarın (Emülsifikasyon varsa, üst katman N-heksan fazını çıkardıktan sonra numuneyi 70 ℃ su banyosunda 10-20 dakika inkübe edin, tekrar tekrar santrifüjleyin).

7) Analiz için alttan 50 µL alın.

Numunenin seyreltme katı: 2

b) Bal

1) 2± 0.05 g homojenize numuneyi (bal) tartın, her bir tüpe 4mL distile su, 0.5mL 1 M HCI ve 100 µL 2-Nitrobenzaldehit (C7H5NO3) ekleyin, 2 dakika boyunca uygun şekilde sallayın;

2) Gece boyunca 37°C'de (yaklaşık 16 saat) veya 56°C'de su banyosu (2 saat) ile inkübe edin.

3) Her tüpe 5mL 0.1M K2HP04, 0.4mL 1M NaOH ve 6mL etil asetat ekleyin, 30 saniye çalkalayın.

4) 10 dakika boyunca oda sıcaklığında (20-25 ℃) 4000r/dk'nın üzerinde santrifüjleyin (Emülsifikasyon varsa veya etil asetat tabakası 3 ml için yeterli değilse, numuneyi 80 ℃ su banyosunda 10 dakika inkübe edin ve tekrar tekrar santrifüjleyin; veya hızı artırın ve santrifüj süresini uzatın).

5) 3 mL etil asetat tabakasını yeni bir santrifüj tüpüne aktarın ve nitrojen veya hava ile 50°C'de kuruyana kadar buharlaştırın.

6) Kuru kalıntıları 2 mL N-heksan içinde çözün, 1 mL seyreltilmiş yeniden çözme solüsyonunu ekleyin, 30 saniye boyunca uygun şekilde karıştırın, oda sıcaklığında (20-25 ℃) 10 dakika boyunca 4000r/dk'nın üzerinde santrifüjleyin;Üst katman N-heksan fazını çıkarın (Emülsifikasyon varsa, üst katman N-heksan fazını çıkardıktan sonra numuneyi 70 ℃ su banyosunda 10-20 dakika inkübe edin, tekrar tekrar santrifüjleyin).

7) Analiz için alttan 50 µL alın.

Numunenin seyreltme katı: 1

 

6. ELISA prosedürleri

 

6.1 Talimatlar

1) Kullanmadan önce tüm reaktifleri ve mikro kuyucuklu stripleri oda sıcaklığına (20-25 ℃) getirin;

2) Kullanımdan hemen sonra tüm reaktifleri 2-8 ℃'ye döndürün;

3) ELISA analizinin tekrarlanabilirliği, büyük ölçüde, plaka yıkamanın kıvamına bağlıdır.Plaka yıkamanın doğru çalışması ELISA prosedürlerinde kilit noktadır;

4) Sabit sıcaklıklarda inkübasyon için, tüm numuneler ve reaktifler ışığa maruz kalmamalı ve her mikroplaka kapak membranı ile kapatılmalıdır.

 

6.2 İşletim prosedürleri

1) Test kitini en az 30 dakika oda sıcaklığına (20-25 ℃) getirin, kullanımdan önce her reaktifin eşit şekilde karışması için çalkalanması gerektiğini unutmayın, gerekli mikro kuyulu stripleri plaka çerçevelerine koyun.Kullanılmayan mikroplakayı tekrar kapatın, 2-8 ℃'de saklayın, dondurmayın.

2) Çözelti hazırlama: 40 mL 20 x konsantre yıkama tamponunu 1:19 oranında deiyonize su ile seyreltin (1 kısım 20 x konsantre yıkama tamponu + 19 kısım deiyonize su).Veya gerektiği gibi hazırlayın.

3) Numaralandırma: mikro kuyuları numunelere ve standart çözeltiye göre numaralandırın;her numune ve standart çözelti iki kopya halinde yapılmalı, konumlarını kaydetmelidir.

4) Ayrı çift kuyucuklara 50µL numune veya standart solüsyon ekleyin;50ul enzim konjugatını ve ardından 50uL antikor çalışma solüsyonunu her kuyucuğa ekleyin, plakayı elle sallayarak hafifçe karıştırın.Mikroplakayı kapak membranı ile kapatın ve 25 ℃'de 30 dakika inkübe edin.

5) Sıvıyı mikro kuyudan boşaltın, emici kağıt üzerinde kuruması için kapağı kapatın, mikroplakayı 15-30 saniye yıkamak için 250µL/kuyucuk yıkama tamponu ekleyin, ardından çıkarın ve emici kağıt ile kurulayın, 4-5 kez tekrarlayın.(Çırptıktan sonra kabarcıklar varsa temiz uçlarla kesin).

6) Renklendirme: Her kuyuya 50µL substrat A ve ardından 50μL substrat B ekleyin.Plakayı elle sallayarak hafifçe karıştırın, ardından renklenmesi için karanlıkta 25 ℃'de 15 dakika inkübe edin.

7) Belirleme: Her kuyucuğa 50µL stop solüsyonu ekleyin.Plakayı elle sallayarak hafifçe karıştırın.Her kuyunun OD değerini belirlemek için mikroplaka okuyucunun dalga boyunu 450nm'ye ayarlayın.(Çift dalga boyunda 450/630nm'de OD değerini 5 dakika içinde okumanızı tavsiye ederiz).

 

7. Sonuç kararı

 

Sonuçları yargılamak için iki yöntem vardır: birincisi kabaca değerlendirme, ikincisi ise nicel belirlemedir.Numunenin OD değerinin AHD içeriği ile negatif bir korelasyona sahip olduğuna dikkat edin.

7.1 Niteliksel belirleme

Konsantrasyon aralığı (ng/mL), örneğin ortalama OD değerinin standart çözeltininkiyle karşılaştırılmasıyla elde edilebilir.Numunenin OD değerinin 0,3 ve numuneninⅡ değerinin 1,0 ppb olduğunu varsayarsak, standart çözeltilerin OD değeri: 0ppb için 2.243, 0.04ppb için 1.816, 0.12ppb için 1.415, 0.36ppb için 0.74, 1.08 için 0.313'tür. ppb, 3,24ppb için 0,155, buna göre numunenin konsantrasyon aralığıⅠ 1,08 ila 3,24ppb ve numuneninⅡ konsantrasyon aralığı 0,12 ila 0,36ppb'dir.

7.2 Nicel belirleme

Absorbans değerlerinin ortalama değerleri, numunenin ve standart solüsyonun ortalama OD değeri (B) için elde edilir ve birinci standart solüsyonun (0 standart) OD değerine (B0) bölünür ve ardından %100 ile çarpılır, yani ,

Absorbans değerinin yüzdesi =	B	×100%
	B0

B—örnek veya standart çözeltinin ortalama (çift kuyu) OD değeri

B0—0ng/mL standart solüsyonun ortalama OD değeri

Standart çözeltinin absorpsiyon yüzdeleri ve AHD standart çözümünün (ng/mL) semilogaritma değerleri ile standart eğriyi sırasıyla Y ve X ekseni olarak çizin.Absorpsiyon yüzdesini standart eğriye dahil ederek standart eğriden numunenin karşılık gelen konsantrasyonunu okuyun.Elde edilen değer daha sonra karşılık gelen seyreltme katıyla çarpılır ve son olarak numunedeki AHD konsantrasyonu elde edilir.

 

8. Önlemler

 

1) Oda sıcaklığı 25°C'den düşüktür veya reaktif sıcaklığı ve numune oda sıcaklığına (20-25°C) döndürülmez, bu da standart OD değerinin düşmesine neden olur.

2) Yıkama işlemi sırasında, mikro plakanın kurumasına, standart eğrinin doğrusal olmaması ve yetersiz tekrarlanabilirlik eşlik edecektir;bu nedenle yıkamadan hemen sonra bir sonraki adıma geçin.

3) İyice karıştırın, aksi takdirde tekrarlanabilirlik zayıf olacaktır.

4) Durdurma solüsyonu 2 M sülfürik asit solüsyonudur, cilt ile temasından kaçının.

5) Son kullanma tarihi geçmiş kiti kullanmayınız.Kitten seyreltilmiş veya katkısız reaktiflerin kullanılması, duyarlılıkta ve saptama OD değerlerinde değişikliklere neden olabilir.Farklı kit gruplarındaki reaktifleri değiştirmeyin.

6) Kullanılmayan mikroplakaları kendi kendine kapanan torbalarda tekrar kapatın.Standart çözümler ve renksiz kuplörler ışığa duyarlıdır ve doğrudan ışığa maruz bırakılamaz.

7) Rengi, solüsyonun bozulduğunu gösteren herhangi bir renklendirme solüsyonunu atın.Standart solüsyon 1 (0 ppb) için 0,5'ten düşük bir saptama değeri, bozulmayı gösterir.

8) Optimum reaksiyon sıcaklığı 25℃'dir ve sıcaklık çok yüksek veya çok düşükse algılama hassasiyeti ve OD değeri değişecektir.

 

9. Saklama ve son kullanma tarihi

 

Depolama: 2 ila 8 ℃'de saklayın, dondurmayın.

Son kullanma tarihi: 12 ay;üretim tarihi kutu üzerindedir.

Not: Mikroplakanın Vakum paketinde sızıntı varsa, kullanımı hala geçerlidir, test sonucunu etkilemez, kullanmak için rahat olun.

 

 

S1: Ne zaman sevk edilecek?
A1: Ödemeyi aldıktan sonra 7 iş günü içinde malları sizin için en kısa sürede göndeririz.(Salgın ve diğer dış etkenlerin olması durumunda nakliyede gecikmeler olabilir)

 

S2: OEM/ODM'yi destekliyor mu?
A2: Desteklenebilir, ancak özelleştirilmiş ürünleri kolaylaştırmak için belirli miktarın 100.000 parçadan fazla olması gerekir.

 

Q3: Fabrikanız kalite kontrol açısından nasıl gidiyor?
A3: Devlet tarafından onaylanmış ISO9001 ve ISO13485'e sahibiz.Üretim sürecimiz, ürünlerin kalitesinin optimal olmasını sağlayabilen standart sürece uygundur.

 

S4: Satış sonrası servis nasıl sağlanır?
A4: Profesyonel çevrimiçi teknik satış sonrası hizmet sunuyoruz.Size video, telefon görüşmeleri vb. şeklinde bire bir rehberlik sağlayabiliriz.

 

S5: Ödeme yöntemi nedir?
A5: T/T ile ödeme alıyoruz.

 

S6: Nasıl gönderilir?
C6: Birçok kooperatif taşıyıcımızdan teklif alarak, sizin için en iyi nakliye yöntemini seçin veya gereksinimlerinize göre gönderebilirsiniz.