Nitrofuran AOZ Kiti Test ELISA Balık Karides Bal Duyarlılığı için 0.01ppb 96Wells/Kit

Balık Karides için Nitrofuran AOZ ELISA Test Kiti Bal Hassasiyeti 0.01ppb 96Wells/Kit

 

1. İlke

Bu food güvenliği hızlı test kitiörnekte AOZ tespiti için rekabetçi enzim immünoanalizine dayanmaktadır.Birleştirme antijenleri, mikro-kuyulu şeritler üzerinde önceden kaplanmıştır.Numunedeki AOZ ve mikro kuyucuk şeritleri üzerine önceden kaplanmış kuplaj antijenleri, anti-AOZ antikorları için rekabet eder.Enzim konjugatının eklenmesinden sonra, renklendirme için TMB substratı eklenir.Numunenin optik yoğunluk (OD) değeri, içindeki AOZ ile negatif bir korelasyona sahiptir.Bu değer standart eğri ile karşılaştırılır ve ardından AOZ konsantrasyonu elde edilir.

2. Bileşenler

1	Mikro kuyu şeritleri	8 çıkarılabilir ile 12 şerit her biri kuyu
2	6× standart solüsyon (her biri 1 mL)	0ppb	0.01 ppb
		0.03 ppb	0.09 ppb
		0.27ppb	0,81ppb
3	enzim eşleniği	7ml	kırmızı şapka
4	Antikor çalışma çözümü	7ml	Mavi şapka
5	Yüzey A	7ml	Beyaz şapka
6	SubstratB	7ml	siyah kap
7	Çözümü durdur	7ml	sarı şapka
8	20x konsantre yıkama tamponu	40ml	Beyaz şapka
9	2 × konsantre yeniden çözünen çözelti	50ml	şeffaf kapak
10	2-Nitrobenzaldehit(C7H5NO3)	10ml	siyah kap

 

3. Teknik özellikler

Hassasiyet: 0.01ppb

Kuluçka Sıcaklığı: 25℃

Kuluçka Süresi: 30dk～15dk

Algılama sınırı

Doku, yumurta, bal: 0.05ppb

Çapraz reaksiyon oranı

AOZ %100

AMOZ <0.1%

AHD <0.1%

SEM <0.1%

Geri Dönüşüm Oranı

Doku, yumurta %95±25

Bal 85±23%

 

4. Gerekli ancak sağlanmayan malzemeler

1) Ekipmanlar:mikroplaka okuyucu, yazıcı, homojenizatör, nitrojen kurutma cihazı, vorteks, santrifüj, ölçüm pipetleri, terazi (0.01 g karşılıklı hassasiyet), inkübatör, su banyosu;

2) Mikropipetörler: tek kanallı 20-200 µL, 100-1000 µL ve çok kanallı 30-300 µl;

3) Reaktifler: NaOH, etil asetat, n-Heksan, HCI (yaklaşık %36,5), K2HPO4·3H2O

 

5. Örnek ön işlem

Talimatlar

Her türlü numunenin ön işleme tabi tutulmasından önce aşağıdaki noktalara dikkat edilmelidir:

1) Deneyler için sadece tek kullanımlık uçlar kullanılabilir ve farklı reaktifleri absorbe etmek için kullanıldığında uçların değiştirilmesi gerekir;

2) Deneyden önce her deney ekipmanı temiz olmalı ve deney sonuçlarına müdahale eden kontaminasyonu önlemek için gerekirse tekrar temizlenmelidir.

Numune ön muamelesinden önce çözelti hazırlığı:

1) 0.1 M K2HPO4: 11.4 g K2HPO4·3H2O'yu deiyonize suda 500 mL'ye kadar çözün.

2) 1 M HCl: 8.6mL HC1'i (yaklaşık %36.5) deiyonize su içinde 100mL'ye çözün.

3) 1 M NaOH: 4g NaOH'yi deiyonize suda 100 mL'ye çözün.

4) 2xkonsantre yeniden çözündürme solüsyonu, numunenin yeniden çözündürülmesi için kullanılan 1:1'de deiyonize su ile (1 mL konsantre yeniden çözündürme solüsyonu + 1mL deiyonize su) seyreltilir.

 

5.1 Numune hazırlama

a)Doku, yumurta

1) 1± 0.05g homojenize numuneyi tartın, her tüpe 4mL distile su, 0.5mL 1 M HCI ve 100µL 2-Nitrobenzaldehit (C7H5NO3) ekleyin, 2 dakika boyunca uygun şekilde sallayın;

2) Gece boyunca 37°C'de (yaklaşık 16 saat) veya 56°C'de su banyosu (2 saat) ile inkübe edin.

3) Her tüpe 5mL 0.1M K2HP04, 0.4mL 1M NaOH ve 6mL etil asetat ekleyin, 30 saniye çalkalayın.

4) 10 dakika boyunca oda sıcaklığında (20-25 ℃) 4000r/dk'nın üzerinde santrifüjleyin (Emülsifikasyon varsa veya etil asetat tabakası 3 ml için yeterli değilse, numuneyi 80 ℃ su banyosunda 10 dakika inkübe edin ve tekrar tekrar santrifüjleyin; veya hızı artırın ve santrifüj süresini uzatın).

5) 3 mL etil asetat tabakasını yeni bir santrifüj tüpüne aktarın ve nitrojen veya hava ile 50°C'de kuruyana kadar buharlaştırın.

6) Kuru kalıntıları 2mL N-heksan içinde çözün, 1 mL seyreltilmiş yeniden çözme solüsyonunu ekleyin, 30 saniye boyunca uygun şekilde karıştırın, oda sıcaklığında (20-25 ℃) 10 dakika boyunca 4000 r/dk'nın üzerinde santrifüjleyin;Üst katman N-heksan fazını çıkarın (Emülsifikasyon varsa, üst katman N-heksan fazını çıkardıktan sonra numuneyi 70 ℃ su banyosunda 10-20 dakika inkübe edin, tekrar tekrar santrifüjleyin).

7) Analiz için alttan 50 µL alın.

Numunenin seyreltme katı: 2

 

b) Bal

1) 2± 0.05 g homojenize numuneyi (bal) tartın, her bir tüpe 4mL distile su, 0.5mL 1 M HCI ve 100 µL 2-Nitrobenzaldehit (C7H5NO3) ekleyin, 2 dakika boyunca uygun şekilde sallayın;

2) Gece boyunca 37°C'de (yaklaşık 16 saat) veya 56°C'de su banyosu (2 saat) ile inkübe edin.

3) Her tüpe 5mL 0.1M K2HP04, 0.4mL 1M NaOH ve 6mL etil asetat ekleyin, 30 saniye çalkalayın.

4) 10 dakika boyunca oda sıcaklığında (20-25 ℃) 4000r/dk'nın üzerinde santrifüjleyin (Emülsifikasyon varsa veya etil asetat tabakası 3 ml için yeterli değilse, numuneyi 80 ℃ su banyosunda 10 dakika inkübe edin ve tekrar tekrar santrifüjleyin; veya hızı artırın ve santrifüj süresini uzatın).

5) 3 mL etil asetat tabakasını yeni bir santrifüj tüpüne aktarın ve nitrojen veya hava ile 50°C'de kuruyana kadar buharlaştırın.

6) Kuru kalıntıları 2 mL N-heksan içinde çözün, 1 mL seyreltilmiş yeniden çözme solüsyonunu ekleyin, 30 saniye boyunca uygun şekilde karıştırın, oda sıcaklığında (20-25 ℃) 10 dakika boyunca 4000r/dk'nın üzerinde santrifüjleyin;Üst katman N-heksan fazını çıkarın (Emülsifikasyon varsa, üst katman N-heksan fazını çıkardıktan sonra numuneyi 70 ℃ su banyosunda 10-20 dakika inkübe edin, tekrar tekrar santrifüjleyin).

7) Analiz için alttan 50 µL alın.

Numunenin seyreltme katı:1

 

6. ELISA prosedürleri

6.1 Talimatlar

1) Kullanmadan önce tüm reaktifleri ve mikro kuyucuklu stripleri oda sıcaklığına (20-25 ℃) getirin;

2) Kullanımdan hemen sonra tüm reaktifleri 2-8 ℃'ye döndürün;

3) ELISA analizinin tekrarlanabilirliği, büyük ölçüde, plaka yıkamanın kıvamına bağlıdır.Plaka yıkamanın doğru çalışması ELISA prosedürlerinde kilit noktadır;

4) Sabit sıcaklıklarda inkübasyon için, tüm numuneler ve reaktifler ışığa maruz kalmamalı ve her mikroplaka kapak membranı ile kapatılmalıdır.

 

6.2 Operasyon prosedürleri

1)Test kitini en az 30 dakika oda sıcaklığına (20-25 ℃) getirin, kullanımdan önce her reaktifin eşit şekilde karışması için çalkalanması gerektiğini unutmayın, gerekli mikro kuyulu stripleri plaka çerçevelerine koyun.Kullanılmayan mikroplakayı tekrar kapatın, 2-8 ℃'de saklayın, dondurmayın.

2)Çözelti hazırlama: 40 mL 20 x konsantre yıkama tamponunu 1:19 oranında deiyonize su ile seyreltin (1 kısım 20 x konsantre yıkama tamponu + 19 kısım deiyonize su).Veya gerektiği gibi hazırlayın..

3)Numaralandırma: mikro kuyuları numunelere ve standart çözeltiye göre numaralandırın;her numune ve standart çözelti iki kopya halinde yapılmalı, konumlarını kaydetmelidir.

4)Ayrı çift kuyucuklara 50 µL numune veya standart solüsyon ekleyin;50 ul enzim konjugatı ve ardından 50 uL antikor çalışma solüsyonunu her kuyuya ekleyin, plakayı elle sallayarak hafifçe karıştırın.Mikroplakayı kapak membranı ile kapatın ve 25 ℃'de 30 dakika inkübe edin.

5)Sıvıyı mikro kuyudan boşaltın, emici kağıt üzerinde kuruması için kapağı kapatın, mikroplakayı 15-30 saniye yıkamak için 250 µL/kuyu yıkama tamponu ekleyin, ardından çıkarın ve emici kağıt ile kurulayın, 4-5 kez tekrarlayın.(Çırptıktan sonra kabarcıklar varsa temiz uçlarla kesin).

6)Renklendirme: her kuyuya 50 µL substrat A ve ardından 50 μL substrat B ekleyin.Plakayı elle sallayarak hafifçe karıştırın, ardından renklenmesi için karanlıkta 25 ℃'de 15 dakika inkübe edin.

7)Belirleme: Her kuyucuğa 50 µL durdurma solüsyonu ekleyin.Plakayı elle sallayarak hafifçe karıştırın.Her kuyunun OD değerini belirlemek için mikroplaka okuyucunun dalga boyunu 450nm'ye ayarlayın.(Çift dalga boyunda 450/630nm'de OD değerini 5 dakika içinde okumanızı tavsiye ederiz).

 

7. Sonuç kararı

Sonuçları yargılamak için iki yöntem vardır: birincisi kabaca değerlendirme, ikincisi ise nicel belirlemedir.Numunenin OD değerinin AOZ konsantrasyonu ile negatif bir korelasyonu olduğuna dikkat edin.

7.1 Niteliksel belirleme

AOZ'nin konsantrasyon aralığı (ng/mL), örneğin ortalama OD değerinin standart çözeltininkiyle karşılaştırılmasıyla elde edilebilir.NumuneninⅠ OD değerinin 0,3 ve numuneninⅡ değerinin 1,0 olduğunu varsayarsak, standart çözeltilerin OD değeri: 0ppb için 2.243, 0.01ppb için 1.816, 0.03ppb için 1.415, 0.09ppb için 0.74, 0.27ppb için 0.313'tür. 0,81ppb için 0,155, buna göre numunenin konsantrasyon aralığıⅠ 0,27ppb ila 0,81ppb ve numuneninⅡ konsantrasyon aralığı 0,03ppb ila 0,09ppb'dir.

7.2 Nicel belirleme

Absorbans değerlerinin ortalama değerleri, numunenin ve standart solüsyonun ortalama OD değeri (B) için elde edilir ve birinci standart solüsyonun (0 standart) OD değerine (B0) bölünür ve ardından %100 ile çarpılır, yani ,

 

Absorbans değerinin yüzdesi =	B	×100%
	B0

 

B—örnek veya standart çözeltinin ortalama OD değeri

B0—0 ng/mL standart solüsyonun ortalama OD değeri

Standart çözeltinin absorpsiyon yüzdeleri ve AOZ standart çözümünün (ng/mL) semilogaritma değerleri ile standart eğriyi sırasıyla Y ve X ekseni olarak çizin.Absorpsiyon yüzdesini standart eğriye dahil ederek standart eğriden numunenin karşılık gelen konsantrasyonunu okuyun.Elde edilen değer daha sonra karşılık gelen seyreltme katıyla çarpılır ve son olarak numunedeki AOZ konsantrasyonu elde edilir.

 

8. Önlemler

1)25 ℃'nin altındaki oda sıcaklığı veya reaktiflerin sıcaklığı ve numunelerin oda sıcaklığına (20-25 ℃) döndürülmemesi, daha düşük bir standart OD değerine yol açacaktır.

2)Mikroplakanın yıkama işleminde kuruluğuna lineer olmayan standart eğriler ve istenmeyen tekrarlanabilirlik gibi durumlar eşlik edecektir;Bu yüzden yıkadıktan hemen sonra bir sonraki adıma geçin.

3)Eşit şekilde karıştırın, aksi takdirde istenmeyen tekrarlanabilirlik olacaktır.

4)Durdurma solüsyonu 2 M sülfürik asit solüsyonudur, cilt ile temasından kaçınınız.

5)Son kullanma tarihi geçen kiti kullanmayınız.Kitlerden seyreltilmiş veya katkısız reaktiflerin kullanılması, duyarlılıkta ve OD değerlerinde tespitte değişikliklere yol açacaktır.Kullanılacak farklı lotların kitlerinden reaktifleri değiştirmeyin.

6)Yeniden mühürlemek için kullanılmayan mikroplakayı otomatik kapanan bir torbaya koyun.Standart solüsyon ve renksiz renk oluşturucu ışığa duyarlıdır ve bu nedenle doğrudan ışığa maruz bırakılamazlar.

7)Bu çözeltinin dejenerasyonunu gösteren herhangi bir renkle renklendirme çözeltisini atın.0,5'ten küçük standart çözelti 1(0 ppb)'nin saptama değeri, dejenerasyonunu gösterir.

8)Optimum reaksiyon sıcaklığı 25 ℃'dir ve çok yüksek veya çok düşük sıcaklıklar, algılama hassasiyeti ve OD değerlerinde değişikliklere neden olacaktır.

 

9. Saklama ve son kullanma tarihi

Depolama: 2-8 ℃'de saklayın, dondurmayın.

Son kullanma tarihi: 12 ay;üretim tarihi kutu üzerindedir.

Not: Mikroplakanın Vakum paketinde sızıntı varsa, kullanımı hala geçerlidir, test sonucunu etkilemez, kullanmak için rahat olun.

 

 

S1: Göndermeniz ne kadar sürer?
A1: Genellikle 7 iş günü içinde kargoya verilir.

 

Q2: OEM/ODM'yi destekliyor musunuz?
A2: desteklenebilir.Özel ihtiyaçlarınıza ve belirli miktarlara göre özelleştirebiliriz.

 

Q3: Fabrikanız kalite kontrol açısından nasıl gidiyor?
A3: ISO9001 sertifikasına ve ISO13485 sertifikasına sahibiz, şimdiye kadar tüm üretim süreci, standart kurallarımız var, hükümetin ilgili davranış ve yasalarına uyuyoruz.

 

S4: Satış sonrası servis garantili mi?
A4: Profesyonel çevrimiçi teknik satış sonrası hizmet sunuyoruz.Ürün deney sırasında başarısız olursa, sağlayabiliriz
telefon, video ve diğer formlar aracılığıyla bire bir rehberlik.

 

S5: Minimum sipariş miktarınız nedir?
A5: 1Kit.

 

S6: Nakliye yöntemi nedir?
A6: Ekspres (FEDEX, UPS, DHL, EMS, vb.) veya hava ve kara yoluyla gönderilebilir. Lütfen sipariş vermeden önce bizimle onaylayın.