Süt Hassasiyeti için Nitrofuran SEM ELISA Gıda Güvenliği Test Kiti 0.02ppb 96Wells/Kit

Süt Hassasiyeti için Nitrofuran SEM ELISA Gıda Güvenliği Test Kiti 0.02ppb 96Wells/Kit

 

1. Nitrofuran SEM ELISA Gıda Güvenliği Test Kiti Prensibi

 

Bu test kiti, numunede Nitrofuran'ın (SEM) tespiti için rekabetçi enzim immünoanalizine dayanmaktadır.Birleştirme antijenleri, mikro-kuyulu şeritler üzerinde önceden kaplanmıştır.Numunedeki Nitrofuran (SEM) ve mikro kuyucuk şeritleri üzerine önceden kaplanmış kuplaj antijenleri, anti-SEM antikorları için rekabet eder.Enzim konjugatının eklenmesinden sonra, renklendirme için TMB substratı eklenir.Numunenin optik yoğunluk (OD) değeri, içindeki SEM ile negatif bir korelasyona sahiptir.Bu değer standart eğri ile karşılaştırılır ve ardından SEM konsantrasyonu elde edilir.

 

2. Teknik özellikler

 

Hassasiyet: 0.02ppb

Kuluçka Sıcaklığı: 25℃

Kuluçka Süresi: 30dk～15dk

Tespit sınırı Doku, yumurta, bal: 0.1ppb

Çapraz reaksiyon oranı

SEM %100

AMOZ < %0,1

AOZ < %0,1

AHD < %0,1

Geri Dönüşüm Oranı

Doku 75±25%

Bal %70±20

Yumurta 95±25%

 

3. Nitrofuran SEM ELISA Gıda Güvenliği Test Kiti Bileşenleri

 

1	Mikro kuyu şeritleri	8 çıkarılabilir ile 12 şerit her biri kuyu
2	6 × standart solüsyon (her biri 1 mL)	0ppb	0.02ppb
		0.06 ppb	0.18 ppb
		0,54 ppb	1.62ppb
3	enzim eşleniği	7ml	kırmızı şapka
4	Antikor çalışma çözümü	7ml	Mavi şapka
5	Yüzey A	7ml	Beyaz şapka
6	SubstratB	7ml	siyah kap
7	Çözümü durdur	7ml	sarı şapka
8	20x konsantre yıkama tamponu	40ml	Beyaz şapka
9	2 × konsantre yeniden çözünen çözelti	50ml	şeffaf kapak
10	2-Nitrobenzaldehit (C7H5NO3)	10ml	siyah kap

 

4. Gerekli ancak sağlanmayan malzemeler

 

1) Ekipmanlar:mikroplaka okuyucu, yazıcı, homojenizatör, nitrojen kurutma cihazı, vorteks, santrifüj, ölçüm pipetleri, terazi (0.01 g karşılıklı hassasiyet), inkübatör, su banyosu;

2) Mikropipetörler: tek kanallı 20-200µL, 100-1000µL ve çok kanallı 30~300µl;

3) Reaktifler: NaOH, etil asetat, n-Heksan, HCI (yaklaşık %36,5), K2HP04.3H2O.

 

5. Örnek ön işlem

 

Talimatlar

Her türlü numunenin ön işleme tabi tutulmasından önce aşağıdaki noktalara dikkat edilmelidir:

1) Deneyler için sadece tek kullanımlık uçlar kullanılabilir ve farklı reaktifleri absorbe etmek için kullanıldığında uçların değiştirilmesi gerekir;

2) Deneyden önce her deney ekipmanı temiz olmalı ve deney sonuçlarına müdahale eden kontaminasyonu önlemek için gerekirse tekrar temizlenmelidir.

Numune ön muamelesinden önce çözelti hazırlığı:

1) 0.1 M K2HPO4: 11.4 g K2HPO4·3H2O'yu deiyonize suda 500 mL'ye kadar çözün.

2) 1 M HCl: 8.6mL HC1'i (yaklaşık %36.5) deiyonize su içinde 100mL'ye çözün.

3) 1 M NaOH: 4g NaOH'yi deiyonize suda 100 mL'ye çözün.

4) 2xkonsantre yeniden çözündürme solüsyonu, numunenin yeniden çözündürülmesi için kullanılan 1:1'de deiyonize su ile (1 mL konsantre yeniden çözündürme solüsyonu + 1mL deiyonize su) seyreltilir.

 

5.1 Numune hazırlama

a) Doku, yumurta

1) 1± 0.05g homojenize numuneyi tartın, her tüpe 4mL distile su, 0.5mL 1 M HCI ve 100µL 2-Nitrobenzaldehit (C7H5NO3) ekleyin, 2 dakika boyunca uygun şekilde sallayın;

2) Gece boyunca 37°C'de (yaklaşık 16 saat) veya 56°C'de su banyosu (2 saat) ile inkübe edin.

3) Her tüpe 5mL 0.1M K2HP04, 0.4mL 1M NaOH ve 6mL etil asetat ekleyin, 30 saniye çalkalayın.

4) 10 dakika boyunca oda sıcaklığında (20-25 ℃) 4000r/dk'nın üzerinde santrifüjleyin (Emülsifikasyon varsa veya etil asetat tabakası 3 ml için yeterli değilse, numuneyi 80 ℃ su banyosunda 10 dakika inkübe edin ve tekrar tekrar santrifüjleyin; veya hızı artırın ve santrifüj süresini uzatın).

5) 3 mL etil asetat tabakasını yeni bir santrifüj tüpüne aktarın ve nitrojen veya hava ile 50°C'de kuruyana kadar buharlaştırın.

6) Kuru kalıntıları 2mL N-heksan içinde çözün, 1 mL seyreltilmiş yeniden çözme solüsyonunu ekleyin, 30 saniye boyunca uygun şekilde karıştırın, oda sıcaklığında (20-25 ℃) 10 dakika boyunca 4000 r/dk'nın üzerinde santrifüjleyin;Üst katman N-heksan fazını çıkarın (Emülsifikasyon varsa, üst katman N-heksan fazını çıkardıktan sonra numuneyi 70 ℃ su banyosunda 10-20 dakika inkübe edin, tekrar tekrar santrifüjleyin).

7) Analiz için alttan 50 µL alın.

Numunenin seyreltme katı: 2

b) Bal

1) 2± 0.05 g homojenize numuneyi (bal) tartın, her bir tüpe 4mL distile su, 0.5mL 1 M HCI ve 100 µL 2-Nitrobenzaldehit (C7H5NO3) ekleyin, 2 dakika boyunca uygun şekilde sallayın;

2) Gece boyunca 37°C'de (yaklaşık 16 saat) veya 56°C'de su banyosu (2 saat) ile inkübe edin.

3) Her tüpe 5mL 0.1M K2HP04, 0.4mL 1M NaOH ve 6mL etil asetat ekleyin, 30 saniye çalkalayın.

4) 10 dakika boyunca oda sıcaklığında (20-25 ℃) 4000r/dk'nın üzerinde santrifüjleyin (Emülsifikasyon varsa veya etil asetat tabakası 3 ml için yeterli değilse, numuneyi 80 ℃ su banyosunda 10 dakika inkübe edin ve tekrar tekrar santrifüjleyin; veya hızı artırın ve santrifüj süresini uzatın).

5) 3 mL etil asetat tabakasını yeni bir santrifüj tüpüne aktarın ve nitrojen veya hava ile 50°C'de kuruyana kadar buharlaştırın.

6) Kuru kalıntıları 2 mL N-heksan içinde çözün, 1 mL seyreltilmiş yeniden çözme solüsyonunu ekleyin, 30 saniye boyunca uygun şekilde karıştırın, oda sıcaklığında (20-25 ℃) 10 dakika boyunca 4000r/dk'nın üzerinde santrifüjleyin;Üst katman N-heksan fazını çıkarın (Emülsifikasyon varsa, üst katman N-heksan fazını çıkardıktan sonra numuneyi 70 ℃ su banyosunda 10-20 dakika inkübe edin, tekrar tekrar santrifüjleyin).

7) Analiz için alttan 50 µL alın.

Numunenin seyreltme katı: 1

 

6. ELISA prosedürleri

 

6.1 Talimatlar

1) Kullanmadan önce tüm reaktifleri ve mikro kuyucuklu stripleri oda sıcaklığına (20-25 ℃) getirin;

2) Kullanımdan hemen sonra tüm reaktifleri 2-8 ℃'ye döndürün;

3) ELISA analizinin tekrarlanabilirliği, büyük ölçüde, plaka yıkamanın kıvamına bağlıdır.Plaka yıkamanın doğru çalışması ELISA prosedürlerinde kilit noktadır;

4) Sabit sıcaklıklarda inkübasyon için, tüm numuneler ve reaktifler ışığa maruz kalmamalı ve her mikroplaka kapak membranı ile kapatılmalıdır.

 

6.2 İşletim prosedürleri

1) Kiti en az 30 dakika oda sıcaklığında (20-25°C) tutun, kullanımdan önce her reaktifin çalkalanması ve iyice karıştırılması gerektiğine dikkat edin ve gerekli mikro kuyu şeritlerini plaka çerçevesine koyun.Kullanılmayan mikroplakalar tekrar kapatılmalı ve dondurulmamalı, 2-8°C'de saklanmalıdır.

2) Solüsyon hazırlama: 40 mL 20x konsantre yıkama tamponu alın ve 1:19 oranında deiyonize su ile seyreltin (1 kısım 20x konsantre yıkama tamponu + 19 kısım deiyonize su).Veya gerektiği gibi hazırlayın.

3) Numaralandırma: Mikrokuyuları numunelere ve standart solüsyonlara göre numaralandırın;her numune ve standart çözelti iki kopya halinde yapılmalı ve konumları kaydedilmelidir.

4) Kuyuları çoğaltmak için 50µL numune veya standart solüsyon ekleyin;her kuyuya 50ul enzim konjugatı ekleyin, ardından 50uL antikor çalışma solüsyonu ekleyin ve hafifçe karıştırmak için plakayı sallayın.Mikroplakayı bir kapak filmi ile kapatın ve 25°C'de 30 dakika inkübe edin.

5) Mikrokuyucuklardaki sıvıyı dökün, emici kağıt üzerinde kurulayın, mikrokuyu plakasını 15-30 saniye yıkamak için 250 μL/kuyu yıkama tamponu ekleyin, ardından çıkarın ve emici kağıt ile kurulayın, 4-5 kez tekrarlayın.(Vurduktan sonra hava kabarcıkları varsa, temiz bir uçla kesin).

6) Renk gelişimi: Her kuyucuğa 50 µL Substrat A ve 50 µL Substrat B ekleyin.Plakayı hafifçe karıştırmak için elle sallayın ve renk gelişimi için karanlıkta 25°C'de 15 dakika inkübe edin.

7) Test: Her kuyucuğa 50 μL durdurma solüsyonu ekleyin.Plakayı elinizle sallayarak hafifçe karıştırın.Her kuyunun OD değerini belirlemek için mikroplaka okuyucunun dalga boyunu 450 nm'ye ayarlayın.(5 dakika içinde 450/630nm çift dalga boyunda OD değerinin okunması tavsiye edilir).

 

7. Sonuç kararı

 

Sonuçları yargılamak için iki yöntem vardır: birincisi kabaca değerlendirme, ikincisi ise nicel belirlemedir.Numunenin OD değerinin SEM içeriği ile negatif bir korelasyona sahip olduğuna dikkat edin.

7.1 Niteliksel belirleme

Konsantrasyon aralığı (ng/mL), örneğin ortalama OD değerinin standart çözeltininkiyle karşılaştırılmasıyla elde edilebilir.Numunenin OD değerinin 0,3 ve numuneninⅡ değerinin 1,0 ppb olduğunu varsayarsak, standart çözeltilerin OD değeri 0ppb için 2.243, 0.02ppb için 1.816, 0.06ppb için 1.415, 0.18ppb için 0.74, 0.54 için 0.313'tür. ppb, 1,62ppb için 0,155, buna göre numunenin konsantrasyon aralığıⅠ 0,54 ila 1,62ppb ve numuneninⅡ konsantrasyon aralığı 0,06 ila 0,18ppb'dir.

7.2 Nicel belirleme

Absorbans değerlerinin ortalama değerleri, numunenin ve standart solüsyonun ortalama OD değeri (B) için elde edilir ve birinci standart solüsyonun (0 standart) OD değerine (B0) bölünür ve ardından %100 ile çarpılır, yani ,

Absorbans değerinin yüzdesi =	B	×100%
	B0

B—örnek veya standart çözeltinin ortalama (çift kuyu) OD değeri

B0—0ng/mL standart solüsyonun ortalama OD değeri

Standart çözeltinin absorpsiyon yüzdeleri ve SEM standart çözümünün (ng/mL) semilogaritma değerleri ile standart eğriyi sırasıyla Y ve X ekseni olarak çizin.Absorpsiyon yüzdesini standart eğriye dahil ederek standart eğriden numunenin karşılık gelen konsantrasyonunu okuyun.Elde edilen değer daha sonra karşılık gelen seyreltme katıyla çarpılır ve son olarak numunedeki SEM konsantrasyonu elde edilir.

 

8. Önlemler

 

1) Oda sıcaklığı 25°C'den düşükse veya reaktif sıcaklığı ve numune oda sıcaklığına (20-25°C) dönmezse, standart OD değeri düşer.

2) Yıkama işlemi sırasında, mikro plakanın kurumasına standart eğrinin doğrusal olmaması eşlik edecek ve tekrarlanabilirlik ideal değil;bu nedenle yıkamadan hemen sonra bir sonraki adıma geçin.

3) İyice karıştırın, aksi takdirde tekrarlanabilirlik zayıf olacaktır.

4) Durdurma solüsyonu 2 M sülfürik asit solüsyonudur, cilt temasından kaçının.

5) Kiti raf ömründen sonra kullanmayınız.Kitten seyreltilmiş veya katkısız reaktiflerin kullanılması, duyarlılıkta ve saptama OD değerlerinde değişikliklere neden olabilir.Farklı kit gruplarındaki reaktifleri değiştirmeyin.

6) Kullanılmayan mikroplakaları kilitli torbalarda tekrar kapatın.Standart çözümler ve renksiz kuplörler ışığa duyarlıdır ve doğrudan ışığa maruz bırakılamaz.

7) Rengi, çözeltinin bozulduğunu gösteren herhangi bir renklendirme çözeltisini atın.Standart Çözüm 1 (0 ppb) için 0,5'ten küçük bir saptama değeri, bozulmayı gösterir.

8) Optimum reaksiyon sıcaklığı 25℃'dir ve sıcaklık çok yüksek veya çok düşükse algılama hassasiyeti ve OD değeri değişecektir.

 

9. Saklama ve son kullanma tarihi

 

Depolama: 2-8°C'de saklayın, dondurmayın.
Son kullanma tarihi: 12 ay;üretim tarihi kutunun üzerindedir.
Not: Mikroplaka vakumlu ambalaj sızdırırsa, test sonuçlarını etkilemeden yine de kullanılabilir, böylece güvenle kullanabilirsiniz.

 

S1: Ne zaman sevk edilecek?
A1: Ödemeyi aldıktan sonra 7 iş günü içinde malları sizin için en kısa sürede göndeririz.(Salgın gibi dış etkenler olması durumunda teslimat gecikebilir)

 

S2: OEM/ODM'yi destekliyor mu?
A2: Desteklenebilir, ancak belirli miktarın özelleştirilmiş ürünler için uygun olan 100.000 parçadan fazla olması gerekir.

 

Q3: Fabrikanız kalite kontrol açısından nasıl gidiyor?
A3: Ulusal olarak ISO9001 ve ISO13485 sertifikasına sahibiz.Üretim sürecimiz, optimum ürün kalitesini sağlamak için standart prosedürlere uygundur.

 

S4: Satış sonrası hizmet nasıl sağlanır?
A4: Profesyonel çevrimiçi teknik satış sonrası hizmet sunuyoruz.Size video, telefon vb. aracılığıyla bire bir rehberlik sağlayabiliriz.

 

S5: Ödeme yöntemi nedir?
A5: T/T ile ödeme alıyoruz.

 

S6: Nasıl gönderilir?
A6: Birçok ortak taşıyıcımızdan fiyat teklifi alarak sizin için en iyi nakliye yöntemini seçin ve ayrıca gereksinimlerinize göre gönderin.