Karides Nitrofuran AMOZ 0.03ppb Süt Gıda Güvenliği Duyarlılığı için Teşhis ELISA Kiti 96Wells/Kit

Süt Hassasiyeti için Nitrofuran AMOZ Teşhis ELISA Kiti 0.03ppb 96Wells/Kit

 

1.Teşhis ELISA KitiPrensip

Bu saptama kiti, numunelerde AMOZ'un saptanması için rekabetçi bir enzim immün testine dayanmaktadır.Konjuge antijenler, mikrokuyu şeritler üzerinde önceden kaplanmıştır.Numunedeki AMOZ, anti-AMOZ antikoru için mikrokuyu şerit üzerinde önceden kaplanmış konjuge antijen ile rekabet eder.Enzim konjugatı eklendikten sonra boyama için TMB substratı eklenir.Bir numunenin optik yoğunluk (OD) değeri, içindeki AMOZ ile negatif ilişkilidir.Bu değer standart bir eğri ile karşılaştırılır ve ardından AMOZ konsantrasyonu elde edilir.

 

2. Teknik özellikler

 

Hassasiyet: 0.03ppb

Kuluçka Sıcaklığı: 25 ℃

Kuluçka Süresi: 30dk~15dk

Tespit limiti Doku, yumurta, bal: 0,1 ppb

çapraz reaksiyon oranı

%100

AHD < %0,1

AOZ < %0,1

SEM < %0,1

Geri Dönüşüm Oranı

Doku 80 ± %25

Bal 75 ± %25

Yumurta 95 ± %25

 

3.Nitrofuran AMOZ ELISA Gıda Güvenliği Test KitiBileşenler

 

1	Mikro kuyu şeritleri	8 çıkarılabilir 12 şerit her kuyu
2	6× standart solüsyon (her biri 1 mL)	0ppb	0.03ppb
		0.09ppb	0,27ppb
		0.81ppb	2,43ppb
3	enzim konjugatı	7ml	kırmızı şapka
4	Antikor çalışma çözümü	7ml	Mavi şapka
5	Substrat A	7ml	Beyaz şapka
6	SubstratB	7ml	siyah şapka
7	Çözümü durdur	7ml	sarı bere
8	20× konsantre yıkama tamponu	40ml	Beyaz şapka
9	2× konsantre yeniden çözme solüsyonu	50ml	şeffaf kapak
10	2-Nitrobenzaldehit (C7H5NO3)	2-Nitrobenzaldehit (C7H5NO3)	2-Nitrobenzaldehit (C7H5NO3)

 

 

4. Gereken ancak sağlanmayan malzemeler
1) Ekipman: mikroplaka okuyucu, yazıcı, homojenleştirici, nitrojen kurutucu, vorteksleyici, santrifüj, ölçüm tüpü, terazi (karşılıklı 0.01g), inkübatör, su banyosu;
2) Mikropipetler: tek kanallı 20-200µL, 100-1000µL, çok kanallı 30-300µl;
3) Reaktifler: NaOH, etil asetat, n-heksan, HCl (yaklaşık %36,5), K2HPO4 3H2O

5. Numune Hazırlama

öğretmek
Herhangi bir numune ön işleminden önce aşağıdaki noktalar ele alınmalıdır:
1) Deneyde yalnızca tek kullanımlık uçlar kullanılabilir ve farklı reaktifler aspire edilirken uçlar değiştirilmelidir;
2) Deneyden önce, deney sonuçlarına müdahale eden kontaminasyonu önlemek için her deney ekipmanı temizlenmeli ve gerekirse yeniden temizlenmelidir.

Numune ön işleminden önce çözelti hazırlama:
1) 0,1 M K2HPO4: 11,4 g K2HPO4 3H2O'yu deiyonize suda 500 mL'ye çözün.
2) 1 M HCl: 8,6 mL HCl'yi (yaklaşık %36,5) deiyonize suda 100 mL'ye çözün.
3) 1 M NaOH: 4 g NaOH'yi deiyonize suda 100 mL'ye çözün.
4) Numunenin yeniden çözülmesi için 2x konsantre yeniden çözme solüsyonunu 1:1 oranında deiyonize suyla (1 mL konsantre yeniden çözme solüsyonu + 1 mL deiyonize su) seyreltin.

 

5.1 Örnek hazırlama

a)Doku, yumurtalar
1) 1±0,05 g homojen numuneyi tartın, her tüpe 4 mL distile su, 0,5 mL 1M HCl ve 100µL 2-nitrobenzaldehit (C7H5NO3) ekleyin ve 2 dakika boyunca uygun şekilde çalkalayın;
2) Gece boyunca 37°C'de (yaklaşık 16 saat) veya 56°C'de (2 saat) bir su banyosunda inkübe edin.
3) Her tüpe 5mL 0,1M K2HPO4, 0,4mL 1M NaOH ve 6mL etil asetat ekleyin ve 30 saniye çalkalayın.
4) Oda sıcaklığında (20-25°C) 4000r/dak'nın üzerinde 10 dakika santrifüjleyin (emülsifikasyon varsa veya etil asetat tabakası 3 ml'den azsa, numuneyi 80°C'de bir su banyosunda 10 dakika inkübe edin ve santrifüjleyin) veya hızı artırın ve santrifüjleme süresini uzatın).
5) 3 mL etil asetat tabakasını yeni bir santrifüj tüpüne aktarın ve 50°C'de nitrojen veya hava ile kuruyana kadar buharlaştırın.
6) Kurutulmuş tortuyu 2 mL n-heksan içinde çözün, 1 mL seyreltilmiş sulandırılmış çözelti ekleyin, 30 saniye iyice karıştırın, oda sıcaklığında (20-25°C) 4000 rpm'den yüksek hızda 10 saniye santrifüjleyin dakika;üst n-heksan fazını çıkarın.(Emülsifikasyon meydana gelirse, üst n-heksan fazını çıkarın, numuneyi 70°C'lik bir su banyosunda 10-20 dakika inkübe edin ve tekrar tekrar santrifüjleyin).
7) Analiz için alt katmandan 50 µL alın.
Numune seyreltme faktörü: 2

b) bal
1) 2±0,05 g homojen numuneyi (bal) tartın, her tüpe 4 mL distile su, 0,5 mL 1 M HCl ve 100 µL 2-nitrobenzaldehit (C7H5NO3) ekleyin, 2 dakika boyunca uygun şekilde çalkalayın;
2) Gece boyunca 37°C'de (yaklaşık 16 saat) veya 56°C'de (2 saat) bir su banyosunda inkübe edin.
3) Her tüpe 5mL 0,1M K2HPO4, 0,4mL 1M NaOH ve 6mL etil asetat ekleyin ve 30 saniye çalkalayın.
4) 10 dakika boyunca oda sıcaklığında (20-25°C) 4000 dev/dak'nın üzerinde santrifüjleyin (emülsifikasyon varsa veya etil asetat tabakası 3 ml'den azsa, numuneyi bir su banyosunda 80°C'de 10 dakika boyunca art arda santrifüjleyin; veya hızı artırın ve santrifüjleme süresini uzatın).
5) 3 mL etil asetat tabakasını yeni bir santrifüj tüpüne aktarın ve 50°C'de nitrojen veya hava ile kuruyana kadar buharlaştırın.
6) Kurutulmuş tortuyu 2 mL n-heksan içinde çözün, 1 mL seyreltilmiş sulandırılmış çözelti ekleyin, 30 saniye iyice karıştırın, oda sıcaklığında (20-25°C) 4000 dev/dak veya daha yüksek hızda santrifüjleyin. 10 dakika;üst n-heksan fazını çıkarın.(Emülsifikasyon meydana gelirse, üst n-heksan fazını çıkarın, numuneyi 70°C'lik bir su banyosunda 10-20 dakika inkübe edin ve tekrar tekrar santrifüjleyin).
7) Analiz için alt katmandan 50 µL alın.
Numune seyreltme faktörü: 1

 

 

6. ELISA prosedürü

6.1 Açıklama
1) Kullanmadan önce tüm reaktifleri ve mikrokuyu şeritlerini oda sıcaklığına (20-25°C) getirin;
2) Kullanımdan hemen sonra tüm reaktifleri tekrar 2-8°C'ye getirin;
3) ELISA deneylerinin tekrar üretilebilirliği, büyük ölçüde plaka yıkamanın kıvamına bağlıdır.Plaka yıkamanın doğru çalışması, ELISA prosedürünün anahtarıdır;
4) Sabit sıcaklıkta inkübasyon sırasında tüm numuneler ve reaktifler ışıktan korunmalı ve her bir mikroplaka bir örtü filmi ile kapatılmalıdır.

6.2 Çalıştırma Prosedürü
1) Kiti en az 30 dakika oda sıcaklığında (20-25°C) bekletin, her reaktifin kullanılmadan önce çalkalanması ve iyice karıştırılması gerektiğini unutmayın ve gerekli mikrokuyu şeritlerini plaka çerçevesine yerleştirin.Kullanılmayan mikroplakalar yeniden kapatılmalı ve 2-8°C'de saklanmalı, dondurulmamalıdır.
2) Çözelti hazırlama: 40 mL 20 x konsantre yıkama tamponu, 1:19 oranında deiyonize su ile seyreltilmiş (1 kısım 20 × konsantre yıkama tamponu + 19 kısım deiyonize su).Veya gerektiği gibi hazırlayın.
3) Numaralandırma: Örneklere ve standart solüsyonlara göre mikrokuyucukları numaralandırın;her numune ve standart çözelti iki kopya halinde yapılmalı ve konumları kaydedilmelidir.
4) Ayrı kuyucuklara 50µL numune veya standart solüsyon ekleyin;her kuyucuğa 50ul enzim konjugatı ekleyin, ardından 50µL antikor çalışma solüsyonu ekleyin ve hafifçe karıştırmak için plakayı elinizle sallayın.Mikroplakayı bir kapak filmiyle kapatın ve 25°C'de 30 dakika inkübe edin.
5) Mikrokuyudaki sıvıyı boşaltın, emici kağıt üzerinde kurulayın, mikrokuyu plakasını 15-30 saniye yıkamak için 250 µL/kuyu yıkama tamponu ekleyin, ardından çıkarın ve emici kağıtla kurulayın, 4-5 kez tekrarlayın.(Vurduktan sonra hava kabarcıkları varsa, bunları temiz bir uçla kesin).
6) Renk gelişimi: Her kuyucuğa 50 µL Substrat A ve ardından 50 µL Substrat B ekleyin. Plakayı elle sallayarak hafifçe karıştırın, ardından rengi geliştirmek için karanlıkta 25 °C'de 15 dakika inkübe edin.
7) Tahlil: Her kuyucuğa 50 μL durdurma solüsyonu ekleyin.Plakayı elinizle sallayarak hafifçe karıştırın.Her kuyunun OD değerini belirlemek için mikroplaka okuyucunun dalga boyunu 450 nm'ye ayarlayın.(OD değerlerinin 450/630nm ikili dalga boylarında 5 dakika içinde okunması önerilir).

 

7. Sonuç değerlendirmesi

 

Sonuçları yargılamak için iki yöntem vardır: Birincisi kaba muhakeme, ikincisi ise nicel belirlemedir.Numunenin OD değerinin AMOZ konsantrasyonu ile negatif bir korelasyona sahip olduğuna dikkat edin.

7.1 Niteliksel belirleme

AMOZ'un konsantrasyon aralığı (ng/mL), numunenin ortalama OD değeri ile standart çözeltininki karşılaştırılarak elde edilebilir.NumuneninⅠ OD değerinin 0,3 ve numuneninⅡ değerinin 1,0 olduğunu varsayarsak, standart solüsyonların OD değeri: 0ppb için 2,243, 0,03ppb için 1,816, 0,09ppb için 1,415, 0,27ppb için 0,74, 0,81ppb için 0,313 , 2,43 ppb için 0,155, buna göre numuneninⅠ konsantrasyon aralığı 0,81 ila 2,43 ppb'dir ve numuneninⅡ'ninki 0,09 ila 0,27 ppb'dir.

7.2 Nicel belirleme

Absorbans değerlerinin ortalama değerleri, örneğin ve standart çözeltinin ortalama OD değeri (B) için birinci standart çözeltinin (0 standart) OD değerine (B0) bölünür ve ardından %100 ile çarpılır, yani ,

Absorbans değerinin yüzdesi =	B	×100%
	B0

B—örnek veya standart çözeltinin ortalama OD değeri

B0—0 ng/mL standart solüsyonun ortalama OD değeri

Sırasıyla Y ve X ekseni olarak standart solüsyonun absorpsiyon yüzdelerini ve AMOZ standart solüsyonunun (ng/mL) semilogaritma değerlerini içeren standart eğriyi çizin.Absorpsiyon yüzdesini standart eğriye dahil ederek standart eğriden numunenin karşılık gelen konsantrasyonunu okuyun.Ortaya çıkan değer daha sonra karşılık gelen seyreltme katıyla çarpılır ve son olarak numunedeki AMOZ konsantrasyonu elde edilir.

 

8. Dikkat edilmesi gereken hususlar
1) Oda sıcaklığı 25°C'den düşük veya reaktif sıcaklığı ve numune oda sıcaklığına (20-25°C) geri dönmedi, bu da standart OD değerinin düşmesine neden olur.
2) Yıkama işlemi sırasında, mikroplakanın kurumasına standart eğrinin doğrusal olmaması ve tatmin edici olmayan yeniden üretilebilirlik eşlik edecektir;bu nedenle, yıkamadan hemen sonra bir sonraki adıma geçin.
3) İyice karıştırın, aksi halde tekrarlanabilirlik zayıf olacaktır.
4) Durdurma solüsyonu 2 M sülfürik asit solüsyonudur, cilt ile temasından kaçınınız.
5) Kiti son kullanma tarihinden sonra kullanmayın.Kitten seyreltilmiş veya tağşiş edilmiş reaktiflerin kullanılması hassasiyette ve saptama OD değerlerinde değişikliklere neden olabilir.Farklı kit gruplarından reaktifleri değiştirmeyin.
6) Kullanılmayan mikroplakaları kendinden kapanan torbalarda yeniden kapatın.Standart solüsyonlar ve renksiz kuplörler ışığa duyarlıdır ve doğrudan ışığa maruz bırakılamaz.
7) Rengi solüsyonun bozulduğunu gösteren herhangi bir renklendirme solüsyonunu atın.Standart solüsyon 1 (0 ppb) için 0,5'ten düşük bir algılama değeri bozulmayı gösterir.
8) Optimum reaksiyon sıcaklığı 25°C'dir ve sıcaklık çok yüksek veya çok düşükse algılama hassasiyeti ve OD değeri değişir.
 

9. Saklama ve geçerlilik süresi
Depolama: 2-8°C'de saklayın, dondurmayın.
Son kullanma tarihi: 12 ay;üretim tarihi kutunun üzerindedir.
Not: Mikroplaka vakum ambalajı sızdırıyorsa test sonuçlarını etkilemeden yine de kullanılabilir, bu nedenle güvenle kullanabilirsiniz.

 

 

S1: Ne zaman sevk edilecek?
A1: Ödemeyi aldıktan sonra 7 iş günü içinde malları mümkün olan en kısa sürede göndeririz.(Salgın gibi dış etkenlerde teslimat gecikebilir)

 

S2: OEM/ODM'yi destekliyor mu?
A2: Desteklenebilir, ancak belirli miktarın, özelleştirilmiş ürünler için uygun olan 100.000'den fazla parça olması gerekir.

 

S3: Fabrikanız kalite kontrol açısından ne durumda?
A3: Ulusal olarak ISO9001 ve ISO13485 sertifikasına sahibiz.Üretim sürecimiz, optimum ürün kalitesini sağlamak için standart prosedürlere uygundur.

 

S4: Satış sonrası hizmet nasıl sağlanır?
A4: Profesyonel çevrimiçi teknik satış sonrası hizmet sunuyoruz.Size video, telefon vb. yollarla bire bir rehberlik sağlayabiliriz.

 

Q5: ödeme yöntemi nedir?
A5: T/T ile ödeme alıyoruz.

 

Q6: nasıl gönderilir?
Y6: Pek çok işbirlikçi taşıyıcımızdan fiyat teklifi alarak sizin için en iyi nakliye yöntemini seçin ve ayrıca gereksinimlerinize göre gönderin.